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今天和大家分享一次超實用的宮頸組織樣品前處理過程!在分子生物學實驗中,樣本前處理直接影響實驗結果的準確性,這次用到的冷凍研磨儀簡直是 “神助攻”!
材料準備清單:
冷凍研磨儀:實驗的核心設備,低溫環(huán)境能有效保護樣品生物活性
冷凍研磨儀 JXFSTPRP-CLN
Trizol:核酸提取的關鍵試劑,能高效裂解細胞
宮頸組織:本次實驗的主角,不同樣本特性決定處理方法
研磨珠、研磨管:輔助研磨,幫助充分破碎組織
詳細實驗步驟:
儀器預冷:實驗前將冷凍研磨儀預冷至 - 20℃,這一步非常重要!低溫環(huán)境能最大限度保留樣品中的生物活性物質,保證后續(xù)實驗的可靠性。
樣品預處理:由于宮頸組織中結締組織含量較高,直接研磨效果不好。我先用手術剪將樣品仔細剪碎,再放入 2ml 研磨管,加入適量研磨珠和核酸提取液 Trizol,采用濕磨的方式進行處理。
設置研磨參數(shù):把研磨儀頻率設為 60Hz,研磨時間 60 秒。這個參數(shù)是我多次實驗總結出來的,能讓組織研磨得既充分又不會過度破壞樣本。
室溫靜置:研磨完成后,將樣品在室溫(15℃-30℃)下放置 5 分鐘,讓核酸蛋白復合物充分分離,為后續(xù)提取做準備。
加入氯仿萃?。好?1ml Trizol 對應加入 0.2ml 氯仿,劇烈振蕩 15 秒后,室溫靜置 3 分鐘。這一步能有效分層,便于后續(xù)分離。
低溫離心:最后在 4℃環(huán)境下進行離心操作,分離出上清液和沉淀物,上清液中就含有我們需要的核酸啦!
實驗效果:
宮頸組織研磨前后效果對比圖
實驗小貼士:
儀器配平:使用冷凍研磨儀和離心機時,一定要注意配平!否則不僅影響實驗結果,還可能損壞儀器。
規(guī)范操作:整個實驗過程最好在通風柜中進行,Trizol 和氯仿都具有一定揮發(fā)性,保護自己才能更好地做實驗!
低溫保護:盡量全程保持低溫環(huán)境,防止樣品失活,從預冷儀器到低溫離心,每一步都不能馬虎!
希望這次的分享能給做相關實驗的小伙伴帶來幫助~通過本次實驗,清晰展現(xiàn)了冷凍研磨儀在宮頸組織樣品前處理中的高效與可靠。從預冷準備到參數(shù)設置,每一個環(huán)節(jié)都至關重要。后續(xù)還將圍繞不同樣本特性及實驗需求,繼續(xù)探索冷凍研磨儀的更多應用可能,期待為大家?guī)砀鄬嵱玫目蒲薪?jīng)驗分享!
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